Abstract

To develop a natural antioxidative peptide, the gelatin was extracted from fish (Yellowfin sole) skin by hot $water(50^{\circ}C)$ extraction method and hydrolyzed with Alcalase, pronase and collagenase through a continuous 3-step membrane reactor. Each step enzymatic hydrolysates were determined the antioxidative activity and their synergistic effects, compared with $\alpha-tocopherol$ and butylated hydroxytoluene (BHT). Also, we tried to investigate the antioxidative disposition of peptide which was successfully separated by gel filtration, ion-exchange chromatography, and HPIC in cultured rat hepatocytes intoxicated with tert-butyl hydroperoxide (TBHP). Second step enzymatic hydrolysate (SSEH) among all hydrolysates and $\alpha-tocoperol$ was showed the strongest antioxidative activity. The optimum concentration of antioxidative activity for SSEH was $1\%(w/w)$ in linoleic acid. The synergistic effects were increased in using the hydrolysate with tocopherol and BHT. In the presence of the peptide isolated from SSEH, supplemented hepatocytes exposed to TBHP showed that delayed cell killing and decreased significantly the lipid peroxidation, compared with hepatocytes not cultured with isolated peptide.

연속식 3단계 막반응기로부터 각 단계별로 분리한 가자미피 젤라틴 가수분해물의 항산화성을 측정한 결과, 2단계 가수분해물의 항산화력이 가장 뛰어날 뿐만 아니라, 천연항산화제인 $\alpha-tocopherol$보다 $10\%$ 정도의 높은 항산화력을 나타낸 반면, 1단계 및 3단계 가수분해물은 $\alpha-tocopherol$보다 오히려 $10\~15\%$ 정도 낮은 항산화력을 보였다. 가수분해물의 첨가한 농도에 따른 항산화성은 유지중량에 대해 $1.0\%(w/w)$로 첨가한 농도에서 최대 항산화력을 나타내었다. 한편, 천연항산화제인 $\alpha-tocopherol$과 합성항산화제인 BHT와의 상승효과를 검토한 결과, 각 단계별 가수분해물은 $\alpha-tocopherol$과 우수한 상승효과를 관찰할 수 있었으며, 그 중 2단계 가수분해물의 상승효과가 가장 강하였다. 또한 항산화성이 가장 뛰어난 2단계 가수분해물로부터 gel column, ion exchange column 및 ODS column을 사용하여 항산화력이 특히 우수한 부분만을 분리한 단일 펩티드를 간세포에 첨가하여 세포생존율에 미치는 효과를 관찰한 결과, TBHP의 독성에 대해 펩티드 첨가구가 무첨가구에 비해 세포생존을 연장시켰으며, lipid peroxidation측정에서도 세포의 산화를 억제함으로써 세포의 생존율을 높였다.

Keywords

• antioxidative peptide;
• yellowfin sole skin gelatin;
• enzymatic hydrolysate