Abstract
A defensin is an inducible antibacterial peptide from a fleshfly and contains 40 residues basic peptide with six cysteines. For the consiruction of recombinant S cerevisiae expressing defensin, the structural gene coding for active defensin was chemically synthesized and fused in fiam to GAP promoter, MFul preprosequence and the GAL7 transcription terminator, generating a recombinant plasnlid pGMD18. S. ce~evisine 2805 Gells were transror~ned to uracil prototroph by the pGMDl8 arid the transformed cells showing antibacterial activity against 111. luteus TAM1056 were selected by growth inhibition zone assay. The optimal culture conditions for the unprovement of the defensin production of a selected tmdonnant were investigated. The optirmzed medium containing 0.4% yeast extract, 2% corn steep liquor, 2.5% glucose and 0.05% $C_2CO_3$, could be determined and the optimum lemperature. and initial pH could be detennnied as $28^{\circ}C$ and pH 3, ~mpectively. The optimized conditioiis revealed the trvofold Increase in the cell growth and the fourfold in the antibaclerial activity. coinpar-ed with tllc Yl'D medium.
효모 Saccharomyces cerevisiae를 숙주 세포로 이용하여 활성형의 항균펩티드를 생산하기 위한 model system으로서 쉬파리 유래 defensin의 합성 유전자를 GAP promoter, mating factor $\alpha$1 (MF$\alpha$1)의 preprosequence 및 GAL7 transcription terminator의 조절하에 있는 재조합 plasmid pGMD18을 제작한 후 Saccharomyces cerevisiae에 형질전환하여 growth inhibtion zone assay를 통해 항균활성을 보유한 재조합 효모를 선별하였다. 재조합 효모의 성장 속도와 defensin의 분비능을 증가시키기 위하여 최적의 배지 조성과 배양조건을 결정하였다. 재조합 효모의 defensin 생산을 위한 최적 배양조건을 조사한 결과 0.4% yeast extract, 유기질소원 2% corn steep liquor, 탄소원 2.5% glucose, 0.05% $C_2CO_3$를 포함한 배지에서 초기 pH3 그리고 배양온도 $28^{\circ}C$의 경우가 세포성장과 defensin 의 항균활성이 가장 우수하였다. 이 조건으로 배양을 수행한 결과 YPD 배지에서 배양한 조건보다 약 2배의 세포 성장과 약 4배의 defenzin 생산을 확인하였다.
