Abstract
A simple, fast and reproducible quantitative analysis method for sugar concentration composed in oligosaccharide mixture was developed. Two glass TLC plates were prepared per sample. After dipping one plate into the copper bicinchoninate reagent and the other plate into 5% sulfuric acid solution, both plates were baked in microwave oven until sugar spots were developed or the surface temperature of TLC plate becomes 60 to 70 $^{\circ}C$. The corrective factor values [F value =(the value of total sugar concentration converted as glucose unit/the value of reducing sugar concentration converted as glucose unit)/(polymerization degree of sugar)] of different molecular weight sugars were determined. Within the concentration of 0.25∼1.0 $\mu\textrm{g}$ in each sample loaded, the fructose-F (corrective factor value of fructose) was 0.45, yet for the higher concentration (2.5∼7.5 $\mu\textrm{g}$) fructose-F was 1.0. In case of glucose, in the range of 0.5∼7.5 $\mu\textrm{g}$, glucose-F was same as fructose-F, 1.0. However, as the molecular weight of sugar was increased, the F values were decreased in both maltodextrin and isomaltodextrin oligosaccharides in 0.5∼7.5 $\mu\textrm{g}$ of each sample loaded. Interestingly, F values were equal for the same molecular weight sugars, although the structures were different from each other. Using F value of each sugar, we could determine and compare the exact total sugar concentration of different molecular weight maltooligosaccharide and isomaltooligosaccharide. We also could determine if the unknown sugar was a reducing or non-reducing compound by using optimized TLC with microwave oven method.
TLC와 microwave 오븐을 이용하여 여러 가지 분자량의 당들의 농도, 그리고 구조에 따른 보정인자값 ｛보정인자값 (F) =[각 당의 실험적 중합도/각 당의 실질적 중합도], 여기서 실험적 중합도 =[실험에서 얻은 총 당량의 농도에 따른 변화율/실험에서 얻은 환원당량의 농도에 따른 변화율]｝을 결정하였다. 플락토오스의 경우 0.25∼1.0 $\mu\textrm{g}$ 농도를 TLC에 점적한 경우에는 보정인자값이 약 0.45로 일정하였고, 2.5∼7.5 $\mu\textrm{g}$인 경우에는 1.0 이었다. 글루코오스의 경우는 0.25∼7.5 $\mu\textrm{g}$의 농도 구간에서 1.0으로 같은 값이 확인되었다. 말토올리고당과 이소말토올리고당 혼합물은 0.5∼7.5 $\mu\textrm{g}$ 농도의 구간에서 보정인자값이 글루코오스를 1.0으로 하여 중합도가 커질수록 말토헵토오스와 이소말토펜타오스까지 일정하게 감소하는 것을 확인하고 그 값을 정해주었다. 또한 새로운 구조의 탄수화물의 환원성과 비환원성 여부를 TLC상에서 쉽게 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구로부터 얻은 결과는 다수의 탄수화물들이 한 가지 시료에 섞여 있는 경우에도 각 구성 당의 실제적 중합도를 아는 경우 절대적 당량을 계산할 수 있고, 탄수화물들 중 환원성 당과 비환원성 당의 구별에 쉽게 활용할 수 있겠다.
