Geographical comparison on different methods for identification of Streptococcus parauberis isolated from cultured olive flounder, Paralichthys olivaceus

양식 넙치에서 분리한 Streptococcus parauberis의 동정방법에 따른 지역적 비교

  • Cho, Mi-Young (Pathology Team, National Fisheries and Development Institute) ;
  • Oh, Yun-Kyeong (Pathology Team, National Fisheries and Development Institute) ;
  • Lee, Deok-Chan (Pathology Team, National Fisheries and Development Institute) ;
  • Kim, Jae-Hoon (Wando Branch, National Fisheries Products Quality Inspection Service) ;
  • Park, Myoung-Ae (Pathology Team, National Fisheries and Development Institute)
  • 조미영 (국립수산과학원 병리연구팀) ;
  • 오윤경 (국립수산과학원 병리연구팀) ;
  • 이덕찬 (국립수산과학원 병리연구팀) ;
  • 김재훈 (국립수산물품질검사원 완도지원) ;
  • 박명애 (국립수산과학원 병리연구팀)
  • Published : 2007.04.30

Abstract

Non-hemolytic Streptococcus parauberis isolated from diseased olive flounder, Paralichthys olivaceus in the South coast of Korea were identified by physiological, biochemical and genetic analysis in order to define the different characteristics geographically. First, twelve strains of S. parauberis were isolated from catalase-negative gram-positive cocci by multiplex PCR assay. Phenotypic identifications were performed with commercially available kit (API 20 Strep and API ZYM system). Analysis of API profiles of the isolates showed that strains were identified as either of Lactococcus lactis, S. constellatus or S. uberis. Moreover, S. parauberis isolated from olive flounder differed from that of turbot (X89967) to the test of not Voges-Proskauer, arginine, hippurate, alkiline phosphatase and pyrroidonyl arylamidase but β-glucuronidase. All S. parauberis isolates were sensitive to florfenicol, ampicillin, ofloxacin and vancomycin but were resistant to oxolinic acid, flumequine, nalidixic acid and sulfisoxazol. However, the 16S rDNA sequences of the isolates showed 99% similarity to S. parauberis KCTC 3651 (AY584477) and a great homogenecity among the flounder isolates.

우리 나라 남해안의 병든 넙치로부터 분리한 non-hemolytic Streptococcus parauberis의 지역적 특성을 구명하고자 균의 생리적, 생화학적 및 분자생물학적 분석을 실시하였다. 먼저, catalase-negative Gram-positive cocci를 대상으로 multiplex PCR을 실시하여 S. parauberis 12 균주를 선정하였으며, 표현형적 동정을 위해 시판되고 있는 API 20 Strep 및 API ZYM kit를 사용하였다. 분리 균주의 API porfile을 분석한 결과, Lactococcus lactis, S. constellatus 및 S. uberis 등으로 동정되었다. 또한, 터봇에서 분리된 S. parauberis와 비교해 볼 때 Voges-Proskauer, arginine, hippurate, alkiline phosphatase 및 pyrroidonyl arylamidase의 반응 결과는 동일하였으나, β-glucuronidase 활성은 다양한 것으로 나타났다. 약제 감수성 시험 결과에서는 florfenicol, ampicillin, ofloxacin 및 vancomycin에 대해 감수성이 있는 것으로 나타났으며, oxolinic acid, flumequine, nalidixic acid 및 sulfisoxazol에 대해 내성이 있는 것으로 나타났다. 그러나, 분리 균주의 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과, 참조균주인 S. parauberis KCTC 3651 (AY584477)과 99%의 상동성을 나타내었으며, 넙치 분리 균주들이 유전적으로 동일한 그룹에 속하는 것으로 나타났다.

Keywords

References

  1. Baeck, G.W., Kim, J.H., Gomez, D.K. and Park, S.C.: Isolation and characterization of Streptococcus sp. from diseased flounder (Paralichthys olivaceusi in Jeju island. J. Vet. Sci., 7: 53-58, 2006 https://doi.org/10.4142/jvs.2006.7.1.53
  2. Bosshard, P.P., Abels, S., Altwegg, M., Bottger, E.C. and Zbinden, R.: Comparison of conventional and molecular methods for identification of aerobic catalase-negative Grampositive cocci in the clinical laboratory. J. clin. Microbiol., 42: 2065-2073,2004 https://doi.org/10.1128/JCM.42.5.2065-2073.2004
  3. Domenech, A., Fernandez-Garayzabal, J.P., Pascual, C., Garcia, J.A., Cutuli, M.T., Moreno, M.A., Collins, M.D. and Dominguez, L.: Streptococcosis in cultured turbot, Scophthalmus maximus (L.), associated with Streptococcus parauberis. J. Fish Dis., 19: 33-38, 1996 https://doi.org/10.1111/j.1365-2761.1996.tb00117.x
  4. Heo, J.H., Jung, M.H., Cho, M.H., Kim, G.H., Lee, K.C., Kim, J. H. and Jung, T.S.: The study on fish diseases with reference to bacterial susceptibility to antibiotics in the southern area of Kyongnam. J. Vet. Clin., 19: 19-22, 2002
  5. Iida, T., Hamasaki, K. and Wakabayashi, H.: Rapid identification for fish pathogenic streptococci by Api 20 strep. Fish Pathol., 26: 93-94, 1991 https://doi.org/10.3147/jsfp.26.93
  6. Mata, A.I., Gibello, A., Casamayor, A., Blanco, M.M. and Dominguez, L.: Multiplex PCR assay for detection of bacterial pathogens associated with warm-water streptococcosis in fish. Appl. Environ. Microbiol., 68: 5177-5180, 2004
  7. Toranzo, A.E., Devesa, S., Heinen, P., Riaza, A., Nunez, S. and Barja, J.L.: Streptococcosis in cultured turbot caused by an Enterococcuslike bacterium. Bull. Eur. Ass. Fish Pathol., 14: 19-23, 1994
  8. Williams, A.M. and Collins, M.D.: Moleculartaxonomic studies on Streptococcus uberis types I and II. Description of Streptococcus paraubris sp. nov. J. Applied Bacteriol., 68: 485-490, 1990 https://doi.org/10.1111/j.1365-2672.1990.tb02900.x
  9. Zlotkin, A., Hershko, H. and Eldar, A.: Possible transmission of Streptococcus iniae from wild fish to culturedmarinefish. Appl. Environ. Microbiol., 64: 4065-4067, 1998
  10. 김종훈, 김은희: 넙치 (Paralichthys olivaceus) 병어에서 분리된 연쇄상구균의 다양성. 한국수산학회지, 36:654-660, 2003
  11. 김종훈, 이창훈, 김은희: 제주도 양식넙치 병어에서 분리된 연쇄상구균의 약제내성 전이성 plasmid. 한국어병학회지, 19:267-276, 2006
  12. 김현정, 우승호, 김진우, 박수일: Streptococcus iniae의 형태학적 특성과 병원성. 한국어병학회지, 18:167-178, 2005
  13. 송진경, 김종훈, 김은희: 연쇄상구균의 표현형적 특성과 RAPD profiles 비교. 한국어병학회지, 16:51-59, 2003
  14. 이덕찬, 이재일, 박찬일, 박수일: 해산 양식어류로부터 분리된 연쇄구균증의 원인균, Lactococcus garvieae에 대한 연구. 한국어병학회지, 14: 71-80, 2001
  15. 이창훈, 하동수: 양식넙치의 연쇄구균증. 한국어병학회지, 4:71-77, 1991
  16. 우승호, 김현정, 이주석, 김진우, 박수일: 해수 양식어류에서 분리된 연쇄상구균의 종류와 병원성. 한국어병학회지, 19:17-33, 2006
  17. 정용욱, 강봉조, 박근태, 허문수:16S-23S rRNA intergenic spacer region을 이용한 어류병원성 Streptococcus iniae의 분자생물학적 동정. 한국어병학회지, 17:91-98, 2004
  18. 허문수, 송춘복, 이제희, 여인규, 전유진, 이정재: 제주산 양식넙치 (Paralichthys olivaceus)로부터 분리된 $\beta$-용혈성 연쇄구균($\beta$-Streptococcus spp.)의 특성. 한수지, 34: 365-369,2001