Abstract
A simple and rapid high-performance liquid chromatography assay for the determination of residual novobiocin levels in bovine, porcine, chicken, flatfish and japanese eel muscle has been developed and validated. The separation condition for HPLC/UV was optimized with phenyl hexyl ($4.6{\times}150mm$, $5{\mu}m$) column with 10 mM monobasic sodium phosphate buffer (pH 2.5)/acetonitrile (50/50, v/v) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min and detection wavelength was set at 254 nm. Residues were extracted from tissue by blending with methanol and lipid materials were removed with n-hexane. Then, the methanol extract was evaporated to dryness under a nitrogen stream, reconstituted in the mobile phase. Aliquot of the organic extract was decanted and filtered through $0.45{\mu}m$ syringe filter. The $20{\mu}L$ of the resulting solution was injected into the HPLC system. The calibration ranges were $0.5{\sim}5{\mu}g/g$ and calibration curves were linear with coefficients of correlation better than 0.95. The limits of quantification were $0.5{\mu}g/g$ for all muscles. The recoveries of bovine, porcine, chicken, flatfish and japaneseel muscles were 99.8%, 102.4%, 91.0%, 104.0% and 93.0%, respectively. The procedures were validated according to the CODEX guideline, determining specificity, linearity, accuracy, precision, quantitation limit and recovery.
본 연구에서는 축산 식품으로 소고기, 돼지고기, 닭고기를 선택하고, 수산 식품으로는 광어와 뱀장어를 선택하여 축 수산 식품 중에 잔류하는 노보비오신의 신속하고 간단한 고속액체크로마토그래피(HPLC) 분석법을 확립하였다. 각 대상 조직시료 일정량에 메탄올을 가하여 균질화한 후, 헥산 용매를 가하여 분석에 방해가 되는 지용성 불순물을 추출 제거하였다. 남은 액을 질소 기류 하에서 완전 건고하고, 여기에 이동상을 가하여 재분산한 후, $0.45{\mu}m$ syringe filter로 여과하고, 이 중 $20{\mu}L$를 HPLC에 주입하였다. HPLC 칼럼으로 phenyl hexyl 칼럼($4.6{\times}150mm$, $5{\mu}m$)을 사용하였고, 이동상으로는 아세토니트릴과 10 mM 인산수소나트륨(monobasic sodium phosphate, pH 2.5)의 혼액(50/50, v/v)을 사용하였으며, 유속은 1.0 mL/min, UV 검출 파장은 254 nm이었다. 각 대상 조직시료에 $0.5{\sim}5{\mu}g/g$의 농도 범위로 표준품을 가하고 검량선을 작성한 결과, 상관계수($r^2$)는 모든 조직 시료에서 CODEX 기준에 적합한 직선성($r^2$ > 0.95)을 보였으며, 정량한계는 $0.5{\mu}g/g$이었다. 각 조직별 평균 회수율은 소 등심 시료가 99.8%, 돼지 삼겹살 시료가 102.4%, 닭 가슴살 시료가 91.0%, 광어 살코기 시료가 104.0%, 뱀장어 살코기 시료가 93.0 %이었다. CODEX 기준을 참조하여 분석법에 대한 검증을 실시한 결과, 양호한 직선성, 정밀성, 정확성 및 회수율을 얻었다.
